Abstract

We report a wide-field fluorescence lifetime imaging (FLIM) system that uses a blue picosecond pulsed diode laser as the excitation source. This represents a significant miniaturization and simplification compared with other time-domain FLIM instruments that should accelerate the development of clinical and real-world applications of FLIM. We have demonstrated this instrument in two configurations: a macroimaging setup applied to multiwell plate assays of chemically and biologically interesting fluorophores and a microscope system that has been applied to imaging of tissue sections. The importance of the adjustable repetition rate of this laser source is discussed with respect to noise reduction and precision in the lifetime determination, illustrating a further significant advantage over conventional mode-locked solid-state lasers.

© 2002 Optical Society of America

Full Article  |  PDF Article

References

  • View by:
  • |
  • |
  • |

  1. R. Sanders, A. Draaijer, H. C. Gerritsen, P. M. Houpt, and Y. K. Levine, Anal. Biochem. 227, 302 (1995).
    [CrossRef] [PubMed]
  2. J. R. Lakowicz, H. Szmacinski, and M. L. Johnson, J. Fluoresc. 2, 47 (1992).
    [CrossRef] [PubMed]
  3. M. V. Rogers, Drug Discovery Today 2, 156 (1997).
    [CrossRef]
  4. S. Andersson-Engels, J. Johansson, U. Stenram, K. Svanberg, and S. Svanberg, IEEE J. Quantum Electron. 26, 2207 (1990).
    [CrossRef]
  5. For instance, J. R. Lakowicz, Principles of Fluorescence Spectroscopy (Plenum, New York, 1983).
    [CrossRef]
  6. K. C. B. Lee, J. Siegel, S. E. D. Webb, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, R. Jones, K. Dowling, M. J. Lever, and P. M. W. French, Biophys. J. 81, 1265 (2001).
    [CrossRef] [PubMed]
  7. D. V. O’Connor and D. Phillips, Time-Correlated Single Photon Counting (Academic, New York, 1984).
  8. E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
    [CrossRef]
  9. S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
    [CrossRef] [PubMed]
  10. S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
    [CrossRef]
  11. K. Dowling, M. J. Dayel, S. C. W. Hyde, P. M. W. French, M. J. Lever, J. D. Hares, and A. K. L. Dymoke-Bradshaw, J. Mod. Opt. 46, 199 (1999).
    [CrossRef]
  12. D. Comelli, C. D’Andrea, G. Valentini, R. Cubeddu, C. Consolandi, G. De Bellis, and L. Rossi-Bernardi, presented at the OSA Biomedical Topical Meetings and Exhibit, Miami Beach, Fla., April 7–10, 2002.
  13. J. Siegel, D. S. Elson, S. E. D. Webb, D. Parsons-Karavassilis, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, M. J. Lever, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Jǔskaitis, L. O. Sucharov, and T. Wilson, Opt. Lett. 26, 1338 (2001).
    [CrossRef]

2002 (1)

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

2001 (2)

2000 (2)

E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
[CrossRef]

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

1999 (1)

K. Dowling, M. J. Dayel, S. C. W. Hyde, P. M. W. French, M. J. Lever, J. D. Hares, and A. K. L. Dymoke-Bradshaw, J. Mod. Opt. 46, 199 (1999).
[CrossRef]

1997 (1)

M. V. Rogers, Drug Discovery Today 2, 156 (1997).
[CrossRef]

1995 (1)

R. Sanders, A. Draaijer, H. C. Gerritsen, P. M. Houpt, and Y. K. Levine, Anal. Biochem. 227, 302 (1995).
[CrossRef] [PubMed]

1992 (1)

J. R. Lakowicz, H. Szmacinski, and M. L. Johnson, J. Fluoresc. 2, 47 (1992).
[CrossRef] [PubMed]

1990 (1)

S. Andersson-Engels, J. Johansson, U. Stenram, K. Svanberg, and S. Svanberg, IEEE J. Quantum Electron. 26, 2207 (1990).
[CrossRef]

Andersson-Engels, S.

S. Andersson-Engels, J. Johansson, U. Stenram, K. Svanberg, and S. Svanberg, IEEE J. Quantum Electron. 26, 2207 (1990).
[CrossRef]

Cole, M. J.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

K. C. B. Lee, J. Siegel, S. E. D. Webb, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, R. Jones, K. Dowling, M. J. Lever, and P. M. W. French, Biophys. J. 81, 1265 (2001).
[CrossRef] [PubMed]

J. Siegel, D. S. Elson, S. E. D. Webb, D. Parsons-Karavassilis, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, M. J. Lever, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Jǔskaitis, L. O. Sucharov, and T. Wilson, Opt. Lett. 26, 1338 (2001).
[CrossRef]

Comelli, D.

D. Comelli, C. D’Andrea, G. Valentini, R. Cubeddu, C. Consolandi, G. De Bellis, and L. Rossi-Bernardi, presented at the OSA Biomedical Topical Meetings and Exhibit, Miami Beach, Fla., April 7–10, 2002.

Consolandi, C.

D. Comelli, C. D’Andrea, G. Valentini, R. Cubeddu, C. Consolandi, G. De Bellis, and L. Rossi-Bernardi, presented at the OSA Biomedical Topical Meetings and Exhibit, Miami Beach, Fla., April 7–10, 2002.

Cubeddu, R.

D. Comelli, C. D’Andrea, G. Valentini, R. Cubeddu, C. Consolandi, G. De Bellis, and L. Rossi-Bernardi, presented at the OSA Biomedical Topical Meetings and Exhibit, Miami Beach, Fla., April 7–10, 2002.

D’Andrea, C.

D. Comelli, C. D’Andrea, G. Valentini, R. Cubeddu, C. Consolandi, G. De Bellis, and L. Rossi-Bernardi, presented at the OSA Biomedical Topical Meetings and Exhibit, Miami Beach, Fla., April 7–10, 2002.

Dayel, M. J.

K. Dowling, M. J. Dayel, S. C. W. Hyde, P. M. W. French, M. J. Lever, J. D. Hares, and A. K. L. Dymoke-Bradshaw, J. Mod. Opt. 46, 199 (1999).
[CrossRef]

De Bellis, G.

D. Comelli, C. D’Andrea, G. Valentini, R. Cubeddu, C. Consolandi, G. De Bellis, and L. Rossi-Bernardi, presented at the OSA Biomedical Topical Meetings and Exhibit, Miami Beach, Fla., April 7–10, 2002.

Dowling, K.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

K. C. B. Lee, J. Siegel, S. E. D. Webb, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, R. Jones, K. Dowling, M. J. Lever, and P. M. W. French, Biophys. J. 81, 1265 (2001).
[CrossRef] [PubMed]

K. Dowling, M. J. Dayel, S. C. W. Hyde, P. M. W. French, M. J. Lever, J. D. Hares, and A. K. L. Dymoke-Bradshaw, J. Mod. Opt. 46, 199 (1999).
[CrossRef]

Draaijer, A.

R. Sanders, A. Draaijer, H. C. Gerritsen, P. M. Houpt, and Y. K. Levine, Anal. Biochem. 227, 302 (1995).
[CrossRef] [PubMed]

Dymoke-Bradshaw, A. K. L.

K. Dowling, M. J. Dayel, S. C. W. Hyde, P. M. W. French, M. J. Lever, J. D. Hares, and A. K. L. Dymoke-Bradshaw, J. Mod. Opt. 46, 199 (1999).
[CrossRef]

Elson, D. S.

Erd-mann, R.

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

Evans, D.

E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
[CrossRef]

French, P. M. W.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

K. C. B. Lee, J. Siegel, S. E. D. Webb, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, R. Jones, K. Dowling, M. J. Lever, and P. M. W. French, Biophys. J. 81, 1265 (2001).
[CrossRef] [PubMed]

J. Siegel, D. S. Elson, S. E. D. Webb, D. Parsons-Karavassilis, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, M. J. Lever, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Jǔskaitis, L. O. Sucharov, and T. Wilson, Opt. Lett. 26, 1338 (2001).
[CrossRef]

K. Dowling, M. J. Dayel, S. C. W. Hyde, P. M. W. French, M. J. Lever, J. D. Hares, and A. K. L. Dymoke-Bradshaw, J. Mod. Opt. 46, 199 (1999).
[CrossRef]

Gerritsen, H. C.

R. Sanders, A. Draaijer, H. C. Gerritsen, P. M. Houpt, and Y. K. Levine, Anal. Biochem. 227, 302 (1995).
[CrossRef] [PubMed]

Gu, Y.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

Hares, J. D.

K. Dowling, M. J. Dayel, S. C. W. Hyde, P. M. W. French, M. J. Lever, J. D. Hares, and A. K. L. Dymoke-Bradshaw, J. Mod. Opt. 46, 199 (1999).
[CrossRef]

Henry, A. C.

E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
[CrossRef]

Houpt, P. M.

R. Sanders, A. Draaijer, H. C. Gerritsen, P. M. Houpt, and Y. K. Levine, Anal. Biochem. 227, 302 (1995).
[CrossRef] [PubMed]

Hyde, S. C. W.

K. Dowling, M. J. Dayel, S. C. W. Hyde, P. M. W. French, M. J. Lever, J. D. Hares, and A. K. L. Dymoke-Bradshaw, J. Mod. Opt. 46, 199 (1999).
[CrossRef]

Johansson, J.

S. Andersson-Engels, J. Johansson, U. Stenram, K. Svanberg, and S. Svanberg, IEEE J. Quantum Electron. 26, 2207 (1990).
[CrossRef]

Johnson, M. L.

J. R. Lakowicz, H. Szmacinski, and M. L. Johnson, J. Fluoresc. 2, 47 (1992).
[CrossRef] [PubMed]

Jones, R.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

K. C. B. Lee, J. Siegel, S. E. D. Webb, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, R. Jones, K. Dowling, M. J. Lever, and P. M. W. French, Biophys. J. 81, 1265 (2001).
[CrossRef] [PubMed]

Juskaitis, R.

Juškaitis, R.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

Lakowicz, J. R.

J. R. Lakowicz, H. Szmacinski, and M. L. Johnson, J. Fluoresc. 2, 47 (1992).
[CrossRef] [PubMed]

For instance, J. R. Lakowicz, Principles of Fluorescence Spectroscopy (Plenum, New York, 1983).
[CrossRef]

Lassiter, S. J.

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

Lee, K. C. B.

K. C. B. Lee, J. Siegel, S. E. D. Webb, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, R. Jones, K. Dowling, M. J. Lever, and P. M. W. French, Biophys. J. 81, 1265 (2001).
[CrossRef] [PubMed]

Legendre, B. J.

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

Leveque-Fort, S.

Lévêque-Fort, S.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

Lever, M. J.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

K. C. B. Lee, J. Siegel, S. E. D. Webb, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, R. Jones, K. Dowling, M. J. Lever, and P. M. W. French, Biophys. J. 81, 1265 (2001).
[CrossRef] [PubMed]

J. Siegel, D. S. Elson, S. E. D. Webb, D. Parsons-Karavassilis, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, M. J. Lever, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Jǔskaitis, L. O. Sucharov, and T. Wilson, Opt. Lett. 26, 1338 (2001).
[CrossRef]

K. Dowling, M. J. Dayel, S. C. W. Hyde, P. M. W. French, M. J. Lever, J. D. Hares, and A. K. L. Dymoke-Bradshaw, J. Mod. Opt. 46, 199 (1999).
[CrossRef]

Levine, Y. K.

R. Sanders, A. Draaijer, H. C. Gerritsen, P. M. Houpt, and Y. K. Levine, Anal. Biochem. 227, 302 (1995).
[CrossRef] [PubMed]

McCarley, R. L.

E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
[CrossRef]

McWhorter, S.

E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
[CrossRef]

Middendorf, L.

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

Neil, M. A. A.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

J. Siegel, D. S. Elson, S. E. D. Webb, D. Parsons-Karavassilis, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, M. J. Lever, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Jǔskaitis, L. O. Sucharov, and T. Wilson, Opt. Lett. 26, 1338 (2001).
[CrossRef]

O’Connor, D. V.

D. V. O’Connor and D. Phillips, Time-Correlated Single Photon Counting (Academic, New York, 1984).

Parsons-Karavassilis, D.

Peterson, R.

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

Phillips, D.

D. V. O’Connor and D. Phillips, Time-Correlated Single Photon Counting (Academic, New York, 1984).

Rogers, M. V.

M. V. Rogers, Drug Discovery Today 2, 156 (1997).
[CrossRef]

Rossi-Bernardi, L.

D. Comelli, C. D’Andrea, G. Valentini, R. Cubeddu, C. Consolandi, G. De Bellis, and L. Rossi-Bernardi, presented at the OSA Biomedical Topical Meetings and Exhibit, Miami Beach, Fla., April 7–10, 2002.

Sanders, R.

R. Sanders, A. Draaijer, H. C. Gerritsen, P. M. Houpt, and Y. K. Levine, Anal. Biochem. 227, 302 (1995).
[CrossRef] [PubMed]

Siegel, J.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

J. Siegel, D. S. Elson, S. E. D. Webb, D. Parsons-Karavassilis, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, M. J. Lever, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Jǔskaitis, L. O. Sucharov, and T. Wilson, Opt. Lett. 26, 1338 (2001).
[CrossRef]

K. C. B. Lee, J. Siegel, S. E. D. Webb, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, R. Jones, K. Dowling, M. J. Lever, and P. M. W. French, Biophys. J. 81, 1265 (2001).
[CrossRef] [PubMed]

Soper, S. A.

E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
[CrossRef]

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

Stenram, U.

S. Andersson-Engels, J. Johansson, U. Stenram, K. Svanberg, and S. Svanberg, IEEE J. Quantum Electron. 26, 2207 (1990).
[CrossRef]

Stryjewski, W.

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
[CrossRef]

Sucharov, L. O.

Sucharov, L. O. D.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

Svanberg, K.

S. Andersson-Engels, J. Johansson, U. Stenram, K. Svanberg, and S. Svanberg, IEEE J. Quantum Electron. 26, 2207 (1990).
[CrossRef]

Svanberg, S.

S. Andersson-Engels, J. Johansson, U. Stenram, K. Svanberg, and S. Svanberg, IEEE J. Quantum Electron. 26, 2207 (1990).
[CrossRef]

Szmacinski, H.

J. R. Lakowicz, H. Szmacinski, and M. L. Johnson, J. Fluoresc. 2, 47 (1992).
[CrossRef] [PubMed]

Valentini, G.

D. Comelli, C. D’Andrea, G. Valentini, R. Cubeddu, C. Consolandi, G. De Bellis, and L. Rossi-Bernardi, presented at the OSA Biomedical Topical Meetings and Exhibit, Miami Beach, Fla., April 7–10, 2002.

Waddell, E.

E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
[CrossRef]

Wahl, M.

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

Wang, Y.

E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
[CrossRef]

Webb, S. E. D.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

J. Siegel, D. S. Elson, S. E. D. Webb, D. Parsons-Karavassilis, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, M. J. Lever, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Jǔskaitis, L. O. Sucharov, and T. Wilson, Opt. Lett. 26, 1338 (2001).
[CrossRef]

K. C. B. Lee, J. Siegel, S. E. D. Webb, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, R. Jones, K. Dowling, M. J. Lever, and P. M. W. French, Biophys. J. 81, 1265 (2001).
[CrossRef] [PubMed]

Wilson, T.

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

J. Siegel, D. S. Elson, S. E. D. Webb, D. Parsons-Karavassilis, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, M. J. Lever, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Jǔskaitis, L. O. Sucharov, and T. Wilson, Opt. Lett. 26, 1338 (2001).
[CrossRef]

Wurm, J.

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

Anal. Biochem. (1)

R. Sanders, A. Draaijer, H. C. Gerritsen, P. M. Houpt, and Y. K. Levine, Anal. Biochem. 227, 302 (1995).
[CrossRef] [PubMed]

Anal. Chem. (2)

E. Waddell, Y. Wang, W. Stryjewski, S. McWhorter, A. C. Henry, D. Evans, R. L. McCarley, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5907 (2000).
[CrossRef]

S. J. Lassiter, W. Stryjewski, B. J. Legendre, R. Erd-mann, M. Wahl, J. Wurm, R. Peterson, L. Middendorf, and S. A. Soper, Anal. Chem. 72, 5373 (2000).
[CrossRef] [PubMed]

Biophys. J. (1)

K. C. B. Lee, J. Siegel, S. E. D. Webb, S. Leveque-Fort, M. J. Cole, R. Jones, K. Dowling, M. J. Lever, and P. M. W. French, Biophys. J. 81, 1265 (2001).
[CrossRef] [PubMed]

Drug Discovery Today (1)

M. V. Rogers, Drug Discovery Today 2, 156 (1997).
[CrossRef]

IEEE J. Quantum Electron. (1)

S. Andersson-Engels, J. Johansson, U. Stenram, K. Svanberg, and S. Svanberg, IEEE J. Quantum Electron. 26, 2207 (1990).
[CrossRef]

J. Fluoresc. (1)

J. R. Lakowicz, H. Szmacinski, and M. L. Johnson, J. Fluoresc. 2, 47 (1992).
[CrossRef] [PubMed]

J. Mod. Opt. (1)

K. Dowling, M. J. Dayel, S. C. W. Hyde, P. M. W. French, M. J. Lever, J. D. Hares, and A. K. L. Dymoke-Bradshaw, J. Mod. Opt. 46, 199 (1999).
[CrossRef]

Opt. Lett. (1)

Rev. Sci. Instrum. (1)

S. E. D. Webb, Y. Gu, S. Lévêque-Fort, J. Siegel, M. J. Cole, K. Dowling, R. Jones, P. M. W. French, M. A. A. Neil, R. Juškaitis, L. O. D. Sucharov, T. Wilson, and M. J. Lever, Rev. Sci. Instrum. 73, 1898 (2002).
[CrossRef]

Other (3)

D. V. O’Connor and D. Phillips, Time-Correlated Single Photon Counting (Academic, New York, 1984).

For instance, J. R. Lakowicz, Principles of Fluorescence Spectroscopy (Plenum, New York, 1983).
[CrossRef]

D. Comelli, C. D’Andrea, G. Valentini, R. Cubeddu, C. Consolandi, G. De Bellis, and L. Rossi-Bernardi, presented at the OSA Biomedical Topical Meetings and Exhibit, Miami Beach, Fla., April 7–10, 2002.

Cited By

OSA participates in CrossRef's Cited-By Linking service. Citing articles from OSA journals and other participating publishers are listed here.

Alert me when this article is cited.


Figures (4)

Fig. 1
Fig. 1

Experimental setup for multiwell plate fluorescence lifetime imaging.

Fig. 2
Fig. 2

Multiwell plate FLIM of (a) Coumarin 314 (τ3300 ps, 5.4×10-2 mg/mL ethanol) and DASPI (τ275 ps, 9.2×10-2 mg/mL ethanol); (b) top to bottom: Coumarin 307 (0.25 mg/mL ethanol), Coumarin 314 (1×10-2 mg/mL ethanol), E-GFP (1 mg/mL buffer), and DASPI (2×10-2 mg/mL ethanol/glycerol solution); (c) 2×10-2 mg DASPI/mL in solvents of various viscosities (top to bottom ethanol/glycerol ratios: 100/0, 80/20, 60/40, and 40/60).

Fig. 3
Fig. 3

FLIM maps of 4µm-diameter fluorescent microspheres (a) with lifetimes calculated by use of time-gated images at delay times of up to 8 ns and (b) including delays of up to 16 ns. The offsets fitted for a 10×12 pixel array of a representative bead are shown in (c) and (d), illustrating ambiguous fitting in (a).

Fig. 4
Fig. 4

Lifetime maps calculated from data made up of 11 delay time intensity images up to a maximum delay of (a) 2×τmax and (b) 5×τmax.

Metrics